AbMole精研抑制剂十年，最新的科研动态不断与您分享。本期与您分享的是：上调 miR-133a-3p可调节IGF1R/PI3K/Akt信号通路介导的内质网应激，提高蟾蜍硫堇诱导的胃癌细胞死亡。

Bufothionine已被用于胃癌(GC)的治疗，但其内在机制却有待进一步研究。本研究的主要目的即揭示其潜在的作用机制。具体来说，研究人员采用CCK-8法和集落形成法检测细胞增殖、流式细胞仪(FCM)和TUNEL法测定细胞凋亡率、DCFH-DA探针测定细胞内ROS含量、qRT-PCR测定miRNA水平, Western Blot检测蛋白含量、双荧光素酶基因法验证IGF1R mRNA中 miR-133a-3p和3’URT区域的结合位点、免疫组化(IHC)检测小鼠肿瘤组织中Ki-67的表达。

具体来说，Bufothionine能够抑制细胞活力、触发内质网应激、促进GC细胞ROS的产生。内质网应激抑制剂Salburinal (Sal)和ROS清除剂NAC都可以抑制Bufothionine诱导的GC细胞死亡。此外，Bufothionine可上调miR-133a-3p，过表达的miR-133a-3p可增强Bufothionine诱导的细胞死亡，敲除miR-133a-3p后细胞凋亡显著减少。此外,miR-133a-3p通过胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)抑制PI3K/Akt信号通路，同时Bufothionine通过上调miR-133a-3p抑制IGF1R和限制PI3K/Akt级联。值得注意的是，过表达miR-133a-3p对bufothionine诱导的GC细胞死亡的促进作用会因为IGF1R的上调而消除，在PI3K/Akt级联抑制剂作用下强化。

总结：Bufothionine通过介导miR-133a-3p/IGF1R/PI3K/Akt轴促进GC细胞凋亡、内质网应激与ROS产生。

CCK-8试剂盒 (Abmole, M4839)为MTT 法的替代方法，是一种基于WST(水溶性四唑盐，化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

作者在研究过程中，考察了Bufothionine对GC细胞增殖的抑制能力。在实验中，分别用0、20、50μg/mL的Bufothionine处理GC细胞，处理时间维0 h、24 h，48 h, 72 h和96 h。采用了Abmole的CCK-8法检测细胞增殖，获得了优质的数据结果。CCK试剂盒使用方便，省去了洗涤细胞，不需要同位素和有机溶剂；检测灵敏度高，甚至可以测定较低细胞密度；其重复性也优于MTT法。

鸣谢：Zhi-Hao Hu, Guo-Jun Wang, Rui-Xin Li, Tian-Yu Zhu, Zhuo-Yin Wang, Heng-Xuan Ding, Xiu-Mei Hu, Upregulation of miR-133a-3p enhances Bufothionine-induced gastric cancer cell death by modulating IGF1R/PI3K/Akt signal pathway mediated ER stress, Life Sciences, Volume 259, 2020,118180.