AbMole精研抑制剂十年，最新的科研动态不断与您分享。本期与您分享的是：MicroRNA-325-3p通过抑制小鼠的RIPK3和程序性坏死来保护心肌梗塞后的心脏。

受体相互作用的丝氨酸-苏氨酸激酶3 (RIPK3)介导的坏死性凋亡与心肌梗死(MI)的进展有关，但其潜在机制，特别是是否涉及microRNA (miR-NAs)，在很大程度上仍然未知。本研究中采用微阵列分析筛选MI小鼠心肌组织miR-325-3p的表达，并通过qRT-PCR证实该表达。使用商业试剂盒测量心肌酶的水平，并利用超声心动图系统检测心脏功能参数。使用H&E、TCC和Masson三色染色检查心脏组织的病理特征和梗死面积，并使用原位TUNEL测定确定细胞凋亡的数量。分离心肌细胞，然后进行体外缺氧诱导。使用蛋白质印迹测量RIPK1、RIPK3和磷酸化MLKL (p-MLKL)蛋白的表达。通过MTT测定分析小鼠心肌细胞活力。使用TargetScan v7.2预测miR-325-3p的mRNA靶标，然后使用双荧光素酶报告基因检测进行验证。miR-325-3p的过表达明显降低乳酸脱氢酶（LDH）、磷酸肌酸激酶（CK）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的表达水平，抑制左心室舒张末期直径（LVEDD）和左心室收缩末期直径(LVESD)，并促进左心室射血分数(LVEF)和左心室缩短分数(LVES)。此外，miR-325-3p的过表达减弱了心脏组织的损伤程度，减少了梗死面积并下调了坏死相关蛋白RIPK1、RIPK3和p-MLKL的表达。结果表明，在MI期间发生的RIPK1/RIPK3/p-MLKL轴诱导的坏死性凋亡是由miRNA模块miR-325-3p介导的，该模块可以通过抑制RIPK3的表达来有效改善MI的症状。

Protease inhibitor cocktail (Abmole, M5293 )由6种蛋白酶抑制剂优化配比配置而成，能够保留蛋白质的完整性，产出率较高。在本研究中用于Western blot实验中保护蛋白质。

Fig. 5 Infuences of miR-325-3p dysregulation on the apoptosis of cardiomyocytes in MI mice.

如图5c Western blot实验结果所示，与健康小鼠的水平相比，它们在MI小鼠中均明显上调（P < 0.01），并且它们在antagomiR-325-3p处理的MI小鼠中达到最高表达水平。然而，agomiR-325-3p的给药大大减弱了它们在MI小鼠心脏组织中的表达水平

Fig. 6 Infuences of miR-325-3p dysregulation on the viability of cardiomyocytes in vitro.

Western blot结果表明，缺氧诱导的心肌细胞中RIPK1、RIPK3和p-MLKL的表达水平显著上调（P < 0.01），并在antago miR-325-3p处理时达到最高水平

鸣谢：Dong-Ying Zhang, et al. BMC Mol Biol. 2019 Jun 27;20(1):17.