AbMole精研抑制剂十年，最新的科研动态不断与您分享。本期与您分享的是:鼻内注射重组RBD疫苗可诱导对含Omicron的SARS-CoV-2变种的长期免疫。
新冠肺炎疫情对全球健康和经济构成巨大威胁。目前已有几种有效疫苗，但由于免疫力下降和新变异株的紧急情况，需要额外的强化免疫以保持或增强免疫反应。肌肉注射诱导粘膜免疫疫苗的不足促使粘膜疫苗的发展。在这里，我们开发了一种佐剂鼻内RBD疫苗，并监测了其对小鼠严重急性呼吸综合征冠状病毒-2 (SARSCoV-2)野生型和突变株(包括Omicron变体)的长期免疫原性。用这种疫苗进行三剂鼻内免疫可诱导并维持血清中中和性IgG抗体的高水平至少1年。强烈的粘膜免疫也被激发，包括粘膜分泌IgA和肺驻留记忆T细胞(TRM)。我们还证明了肺TRM细胞的长期存在是局部t细胞增殖的结果，而不是T细胞从淋巴结迁移的结果。我们的数据表明，鼻内佐剂RBD疫苗是一种有前途的候选疫苗，可在全身和局部建立对SARS-CoV-2的强大、持久和广泛的保护性免疫。
FTY720(Abmole，M1712，纯度>99%)是一种1-磷酸-神经鞘氨醇S1P受体拮抗剂，IC50为0.33 nM。S1P作用于K562细胞，抑制NK细胞裂解。多种浓度FTY720可逆转S1P的抑制作用，IC50为173 nM。此外, 10 nM FTY720单独温育时，对共刺激分子的表达没有任何影响。
Fig. 6 Lung T-cell responses result from T-cell migration into lungs after prime immunization with the intranasal RBD vaccine.
鼻内RBD疫苗诱导激活的T细胞在启动时迁移到肺部，在增强时直接在肺部扩展T细胞。我们接下来探索肺部TRM细胞的维持是由肺部预先定位的T细胞介导的，还是由接种疫苗后从循环中招募的T细胞介导的。在接种疫苗前两天开始用FTY720治疗小鼠，以阻断T细胞从淋巴器官的出口(图6a)。初步免疫后7天，收集肺组织和血液样本，分别分析T细胞应答和血清IgG滴度。如预期的那样，FTY720治疗显著减少了血液中T淋巴细胞的数量，包括总T细胞(CD3+)、CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、记忆CD4+ (CD4+CD44+)和CD8+ T细胞(CD8+CD44+)。无论是否接种疫苗。这表明FTY720在阻断T细胞进入循环中的释放方面是有效的。
与之前的结果相似，我们观察到，早在初步免疫后7天，PEI佐剂RBD就显著增加了肺驻留T细胞的百分比和数量，包括CD4 +、CD8 +、记忆CD4 +和记忆CD8 + T细胞，这些T细胞高度表达CD69和CD103(图6b-e)。像PEI这样的阳离子纳米载体可以通过正电荷和负电荷粘蛋白基团之间的静电相互作用来延长抗原在鼻腔的停留时间。此外，PEI佐剂由于其颗粒特性，可以促进抗原的摄取，并促进抗原提呈细胞的成熟。因此，与自然感染相比，鼻内免疫用PEI佐剂疫苗可以引起更强、更快的先天和适应性免疫反应。
在FTY720存在的情况下，我们发现即使在PEI + RBD免疫小鼠的肺中，CD3+ T细胞的总数和百分比也急剧下降。因此，检测肺TRM细胞的绝对数量变化可能比检测频率变化更合适。FTY720处理后，当PEI + RBD免疫时，仅能检测到少量肺常驻T细胞(图6b-e)。肺常驻T细胞的免疫荧光分析证实了这些发现(图6f)。此外，FTY720抑制了PEI + RBD免疫后第7天血清RBD特异性IgG抗体的生成(图6g)。这些结果表明，最初的T细胞启动发生在淋巴结而不是肺部，与之前的研究一致。我们还观察到，与PBS免疫相比，PEI + RBD免疫后血液T细胞(包括记忆T细胞)数量减少。这一发现进一步证明了肺内CD4+和CD8+ T细胞的形成需要T细胞在启动后从循环系统迁移到肺部。
Fig. 7 Intranasal immunization with the adjuvanted RBD vaccine directly activates T cells in the lungs at boost.
为了确定T细胞在刺激时被激活的部位，14天后，在FTY720存在的情况下，各组小鼠被PBS或PEI + RBD刺激(图7a)。血液T细胞数量的分析也证明了FTY720治疗的有效性(数据未显示)。在该模型中，阻断来自血液的T细胞迁移对CD69+CD103+表型的肺驻留T细胞的形成没有显著影响，包括肺驻留CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、记忆CD4+ T细胞和记忆CD8+ T细胞(图7b-e)。免疫荧光分析还显示，强化免疫后，FTY720治疗未导致表达组织标记CD103的肺CD4+和CD8+ T细胞的任何死亡(图7f)。PEI + RBD免疫在强化免疫14天后可诱导血清中产生高水平的RBD特异性IgG反应。然而，如果小鼠在未进行FTY720处理的情况下被启动，FTY720处理对产生抗原特异性抗体反应没有影响(图7g)。总的来说，这些数据表明强化疫苗接种可以直接在肺组织中引起局部抗原呈递和T细胞的自我更新，而不依赖于T细胞的循环运输。
鸣谢：Hong Lei, et al. Signal Transduct Target Ther. 2022 May 17;7(1):159.
