AbMole精研抑制剂十年，最新的科研动态不断与您分享。本期与您分享的是：共价CDK7抑制剂THZ1通过抑制人肾细胞癌的自噬增强西罗莫司诱导的细胞毒性。

肾细胞癌（RCC）是一种主要的肾脏癌症。5年生存率总体为74%，而4期癌症仅为8%。包括酪氨酸激酶抑制剂、mTOR抑制剂和免疫检查点抑制剂在内的几种药物可用作转移性肾细胞癌的一线或二线治疗。然而，生存的好处是有限的。最近，THZ1已被鉴定为干扰转录机制的细胞周期蛋白依赖性激酶7 (CDK7)抑制剂。尽管它在各种癌症模型中显然有效，但从未报道过RCC的数据。在这项研究中，我们在临床队列中证明了CDK7表达对肿瘤进展和患者生存的影响。我们发现THZ1在RCC细胞中诱导细胞凋亡和细胞周期停滞，从而降低细胞活力。此外，THZ1在体外与temsirolimus有协同作用，可能是通过抑制自噬。此外，与单独使用THZ1或西罗莫司相比，联合治疗进一步抑制了体内肿瘤的生长。这些结果表明CDK7与RCC的进展和预后相关，是克服该癌症耐药性的潜在治疗靶点。

THZ1（Abmole，M5228，纯度98.33%）是一种是共价的CDK7抑制剂，在本研究中用于处理细胞，贯穿全程试验过程。

Fig. 2.THZ1induces apoptosis in human renal cell carcinoma (RCC) cells

为了评估THZ1在RCC细胞中的细胞毒作用，进行了MTT测定以估计用各种浓度的THZ1处理24小时和48小时后786-O、Caki-2、ACHN和A 498细胞的活力（图2A和B）。细胞活力以剂量依赖性方式降低。随着治疗持续时间的增加，活力进一步降低。对于786-O细胞，24小时后未达到半数最大抑制浓度(IC50)，48小时后约为150 nM。786-O细胞所需的剂量高于Caki-2细胞。这些结果表明THZ1对RCC细胞具有细胞毒作用。

为了评估THZ1对RCC细胞凋亡的影响，用THZ1处理24小时后在786-O细胞中用膜联蛋白V染色进行流式细胞术（图2C）。随着THZ1的浓度增加到200 nM，凋亡细胞的比例从9.3%增加到39.5%。在Caki-2细胞中观察到类似的结果（图2D）。

Fig. 3.THZ1inhibits the proliferation of RCC cells by inducing G1 cell cycle arrest

为了评估THZ1对细胞周期调节的影响，进行了流式细胞术来估计细胞周期各个阶段的细胞比例。随着剂量的增加，THZ1处理导致786-O和Caki-2细胞中G0/G1期的细胞比例增加（图3A和B）。此外，进行了免疫印迹以评估细胞周期相关蛋白的变化（图3C和D）。一致地，结果显示细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白D3、CDK4、CDK6、Cdc2、PCNA和cdc25c的剂量依赖性减少，以及p27的剂量依赖性增加为了评估细胞周期停滞的结果，进行了BrdU测定以估计细胞增殖活性（图3E）。在THZ1处理后，两种细胞的增殖能力均下降。总的来说，这些结果表明THZ1通过调节细胞周期来减少RCC细胞的生长。

Fig. 4. The synergistic effect ofTHZ1and temsirolimus on human RCC cells

由于RCC患者对temsirolimus的耐药性很常见，我们在将固定剂量的THZ1(200 nM)和不同剂量的temsirolimus (0-50 μM ) (图4A和B)。在两种细胞系中，与单独用相同浓度的西罗莫司处理的组中的细胞活力相比，THZ1显著降低了细胞活力。当与THZ1联合使用时，需要低得多的西罗莫司剂量才能达到相同的细胞毒性作用。此外，为了确认THZ1和temsirolimus的协同作用，我们在不同浓度下测试了这两种药物。结果表明THZ1与temsirolimus联合用药具有协同作用，THZ1在克服对temsirolimus耐药方面具有潜在作用。

鸣谢：Po-Ming Chow, et al. Cancer Lett. 2020 Feb 28;471:27-37.