BCA测蛋白浓度的步骤（具体见图）： 1⃣️收集细胞并裂解，低温高速离心后取上清，记录上清体积 2⃣️ 配置BCA工作液，孔数为标准样品孔数（一般为6）+样品数×2（每个样品2个·复孔），再乘1.1作为损耗。每孔A液200uL，B液4uL，现配现用。 3⃣️在96孔板中，依次加入0、1、2、4、6、8ul的2ug/ul的标准蛋白样品。待测蛋白样品每孔2ul，每个样品加2个复孔。之后每个孔加200ul工作液。可以不用水补齐体积，对结果几乎没有影响。 4⃣️ 37℃孵育30min，使用酶标仪在562nm波长处测量吸光度值（OD值）。 5️⃣根据标准曲线计算出未知样品的蛋白浓度，加入5×loading buffer，煮蛋白。 注意事项： 📌5×loading buffer的5×的意思是5倍浓缩，因此最后在样品中占1/5的体积。记住这一点，就容易计算想把所有样品调成所有浓度时应该加多少loading buffer和多少水。图中的公式是先用5×loading buffer和ddH20按照1：4的比例配成1×loading buffer再使用，计算上会容易一些。 📌BCA是精细的实验，从标准曲线的R2、两个复孔之间的差异，可以反映出你的操作是不是精准。多练，一定会有进步。记得选用准的、顺手的移液器。 📌5×loading buffer很粘稠，容易粘在枪头外壁，造成误差。 📌煮完蛋白，先冷却、离心后再保存蛋白，是为了把冷凝水也和样品混合，使样品成分均一。跑WB前也应该涡旋、离心，充分混匀蛋白，再上样。 最近做实验都在用比克曼的耗材。自封袋坚固耐用，装了样品放-80℃都没问题！而且自带白色标记区域，写标记清晰易读。离心管也用了很久了，非常可靠，刻度清晰准确，耐高速离心和高温高压，而且是无菌的，细胞实验和分子实验都在用！