[微笑R]在Western Blot实验中，挑选一个恰当的内参对照是极为关键的一步。内参，也被称作内部参照，指的是在相同样本中表达保持稳定的内源性蛋白质，它们充当了实验中衡量蛋白表达水平变化的基准线。 1⃣ 考虑物种，选择管家基因 在挑选内参抗体时，首先需要考虑的是样本的物种来源。对于来自哺乳动物组织或细胞的样本，常见的内参蛋白有β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B和Histone H3等。若样本来自非哺乳动物或不常见的物种，研究相关文献或选择那些由高度保守的管家基因编码的蛋白质作为内参会更合适。 2⃣ 分子量匹配原则 在选择内参时，还应考虑目标蛋白与内参蛋白分子量的差别。理想状况下，两者的分子量至少应相差5 kDa，以确保在凝胶电泳过程中能够有效分离。例如，如果目标蛋白的分子量是45 kDa，那么应避免使用分子量相近的β-actin作为内参；相反，选择GAPDH或β-tubulin会是更佳的选择。 3⃣ 考虑蛋白的分布位置 针对不同类型的蛋白质检测，选择相应的内参可以提升实验的精确度。一般蛋白质检测时，可以使用GAPDH、β-actin或β-tubulin作为内参。而对于亚细胞器蛋白的检测，则更适宜选择该亚细胞器特有的内参。比如，在检测核蛋白时，常用的内参包括Lamin A、Lamin B、TBP、YY1、Histone H3；检测膜蛋白时，ATP1A1是一个常用的内参；线粒体蛋白检测中，VDAC1和COX IV则是常用的内参。 4⃣ 特殊情况下的内参选择 值得注意的是，内参的选择应依据实验的具体条件来调整。在某些特定情况下，即便是管家基因编码的蛋白，其表达水平也可能会受到实验条件的影响。例如，在研究糖代谢相关课题（如糖尿病模型）时，应避免使用GAPDH作为内参；在缺氧环境下，GAPDH的表达可能会受到影响，因此也不宜作为内参；在细胞增殖的实验中，由于c-Jun的表达水平可能会发生变化，它不适合作为内参；同样，在凋亡实验中，TBP、Lamin等核内参也可能不适用。 [彩虹R]平时师弟熬夜做实验多伤肝蛮严重，今天给他带了藏茵陈，希望他的科研越来越顺利呀