1⃣ 选择合适的转染试剂 ：不同的细胞类型对转染试剂的敏感性不同，选择适合特定细胞类型的转染试剂可以显著提高转染效率。 2⃣ 细胞培养条件 ：确保细胞在转染前处于健康状态，并且转染时密度合适，不要过高或过低。 3⃣ 优化转染方案 ：可以对DNA或siRNA的使用量做梯度，寻找合适的使用量。 4⃣ 转染后处理 ：转染后减少对细胞的扰动，比如频繁移动、直接使用冰箱里拿出的冷培养基换液、在孵箱外暴露太长时间等，以减少对细胞的损伤。 5⃣ 优化序列或载体设计 ：载体的某些特性，如启动子的强度、载体的大小、序列的稳定性等，都可能影响转染效率。siRNA或shRNA靶向的序列也会影响转染效率。 6⃣ 使用报告基因 ：通过使用报告基因（如绿色荧光蛋白GFP、荧光素酶等）来监测转染效率。 7⃣ 避免血清或双抗干扰 ：在某些转染方法中，血清或抗生素可能会干扰转染过程，因此在转染过程中可能需要去除或减少血清。 8⃣ 更换细胞系 ：某些细胞系可能更容易转染，如果实验允许，可以考虑使用这些细胞系完整步骤和转染效果，比如293T。