科研 科研日常 线粒体 免疫荧光染色 在细胞免疫荧光染色中，可以选择不同抗体标记。也可以先以质粒转染标记或者染料标记，再做后续的免疫荧光步骤。在做染料标记时，很多时候后续的免疫染色步骤会影响染料标记效果。而有的蛋白在没有合适的抗体做免疫染色时，就需要做相应质粒标记。在做质粒标记时，可以选择标签质粒，这样可以用标签抗体来做免疫染色。也可以选择荧光质粒标记，选择荧光质粒标记时，后续的免疫染色步骤会影响荧光质粒的荧光吗？ [向右R][向右R][向右R]我们先转染了一个绿色荧光的目标蛋白，该目标蛋白会影响线粒体形态，绿色荧光蛋白相对来说对酸性pH敏感，我们看一下其表达后进行后续的线粒体免疫染色步骤是否会影响其荧光。结果发现合适的免疫染色步骤并不会影响荧光质粒的荧光效果。即便线粒体形态发生了改变，但绿色荧光依然可以维持荧光效果。同时我们也发现荧光质粒本身也不会影响后续线粒体免疫染色的效果，其对线粒体形态的影响也不会因为免疫染色而改变。 [向右R][向右R][向右R]在细胞免疫染色步骤中，需要注意选择合适的固定剂，通透剂以及抗淬灭剂。特别注意在做细胞线粒体免疫荧光时，不要选择组织细胞双用的固定剂，组织相对来说有厚度，这类固定剂常会在多聚甲醛外+其他渗漏剂，这个强度在做细胞免疫荧光强会比较强，有时候会让细胞碎碎的，线粒体免疫染色出来也没有明显的形态，切记切记。