科研 科研日常 线粒体 原代神经元 最近有上的同学问关于原代神经元的线粒体染色问题，猫老师曾经在研究生阶段短暂的做过一段原代多巴胺能神经元的线粒体染色，经验不多有一点。 [向右R][向右R][向右R]一般来说，原代神经元的线粒体染色不像我们平常培养的贴壁细胞系那么好做，原因一是因为原代神经元需要现提现做，一般不能增殖传代。二是提取原代神经元时有时候会混杂一定比例的杂细胞，比如胶质细胞和成纤维细胞等。三是原代神经元的线粒体本身形态不像模式细胞的线粒体那么好看。 [向右R][向右R][向右R]原代神经元根据提取的不同位置有皮层，海马，中脑多巴胺能神经元等。常用的是海马神经元。原代神经元想做的好看一般需要胎鼠，鼠龄越大越不好培养且神经元线粒体染色会更难做。为了原代神经元的贴壁，一般需要PLL提前包被板子或者玻片，我们一般过夜包被让溶液干片，第二天PBS清洗，免疫染色时PLL包被有时候会产生背景噪点，所以要清洗一下。 [向右R][向右R][向右R]因为时间久远，具体的提取方法已经忘记。但有一点提取时胎鼠脑膜一定要剥离干净，不然会混杂很多杂细胞。提取后培养时间也要注意，太短神经元延展性不好，太长可能会影响不能增殖的神经元的生长。培养后可以普通光镜下观察一下是否具有神经元的形态。 [向右R][向右R][向右R]原代神经元线粒体染色，活细胞时一般用线粒体染料染色以标记，但更常用的是免疫染色，因为有时候需要同时做神经元的标记marker以示区分。神经元胞体处线粒体染色很多时候都是团成一块，很难区分出形态到底怎么样，能区分出形态的一般是胞体延伸出的突起部分。所以要注意神经元的培养天数。