[种草R]抗体法：在体外联合使用抗CD3和CD28的抗体刺激T细胞，抗CD3单克隆抗体识别 TCR-CD3复合体上CD3分子的ε链并相互作用，从而增强T淋巴细胞的活化与增殖。抗CD28单克隆抗体与B7-CD28复合体上的CD28分子相互作用，能提供有效的共刺激信号，激发T细胞增殖，可诱导T细胞的分化、增殖和IL-2等细胞因子的分泌。从而模拟T细胞活化的双信号作用。 a) 使用anti-human CD3抗体（无菌PBS稀释）包被24孔板，包被浓度1μg/mL；室温放置4 h（也可4℃包被过夜），吸去未结合的抗体悬液； b) 每孔加入500 μL含1%BSA的PBS溶液进行封闭，室温30 min，结束后用无菌PBS洗涤1次； c) PBMC接种于上述24孔板中，接种密度1*106/mL，培养体系为含10%热灭活胎牛血清、1%双抗、3μg/mL anti-human CD28、100 IU/mL human IL-2的RPMI-1640培养基； d) 培养3天后，收集细胞，计数，台盼蓝染色检测细胞活力，用于进一步分析。 [种草R]磁珠法：以美天旎T Cell TransAct™, huma为例：在100nm右旋糖苷基质上分别耦联人源化的CD3、CD28抗体，高效模拟抗原递呈过程，实现高效、持久的T细胞激活。使用时，按照体积比1:100加入即可。 注意事项： [一R]原代T细胞一般在体外的培养时间不超过三周，用于功能实验的T细胞建议培养时间在14天以内。 [二R]抗体法中CD3和CD28的包被浓度需要摸索确定，一般为1-10ug/ml，且多采用CD3包被，CD28游离的方法。 [三R]磁珠法中，磁珠分为微米级和纳米级，以T Cell TransAct™, human（130-128-758，纳米级）和T Cell Activation/Expansion Kit, human（130-091-441，微米级）为例， 130-128-758（微米级）是通过换液，或者离心清洗就可以去除，130-091-441（微米级）则通过MACSiMAG分选器去除磁珠和抗体。 以上内容均来自《细胞大师训练营第一站：免疫卫士-T细胞》讲座，7月还有第二站：免疫前线的指挥官—DC细胞的系列讲座： [一R]DC细胞样本制备及分选全面解决方案 [二R]DC细胞体外培养、鉴定及质量控制 [三R]善假于物-DC细胞研究“利器”全攻略