一、实验准备细胞 选择对数期生长的、细胞密度达80-90%左右的肿瘤细胞。细胞状态对成瘤效果有很大影响，务必确保细胞处于良好状态。通常每只小鼠需要两个100ml培养皿的细胞量 小鼠准备 选择年龄适中（如5-6周龄）的免疫缺陷裸鼠。裸鼠由于没有胸腺等免疫器官，免疫力几乎为零，对肿瘤细胞没有免疫作用，易于成瘤 确保小鼠健康状况良好，无疾病症状 二、细胞收集与制备细胞消化：弃掉旧培养基，用PBS（磷酸盐缓冲液）清洗细胞1-2次，去除细胞中的血清 使用胰酶消化细胞，待细胞变圆未脱离培养皿时，去除胰酶，加入无血清培养基制成细胞悬液 细胞悬液制备 将细胞悬液进行离心，去除上清液。用PBS或无血清培养基重悬细胞，并进行细胞计数，计算所需的终浓度。通常皮下瘤接种时，细胞悬液的浓度约为1-5×106个细胞 三、小鼠接种固定小鼠 用左手固定小鼠，使其处于舒适且稳定的姿势 皮下注射：在小鼠的左侧腋窝处进行皮下注射 注射时，将针头深入皮下约1厘米，以减少注射后细胞悬液从针眼溢出的可能性。缓慢注射细胞悬液，注射体积通常为100微升 在接种过程中，应将细胞悬液放置在冰上，以减缓细胞凋亡 四、接种后处理饲养观察：接种完成后将小鼠放回其笼中继续进行饲养。大约1周后可以观察到肿瘤的形成 根据实验设计，需要定期监测肿瘤的生长情况，如测量肿瘤的大小、记录生长曲线等 肿瘤处理：根据实验设计，在肿瘤体积达到一定大小（如不超过1000-2000mm³）之前，需要对小鼠进行安乐死 后续处理可能包括拍照、测量体积、提取蛋白质和RNA等 五、注意事项细胞状态 细胞在指数生长阶段收集非常重要，因为细胞状态对细胞系移植后的活力有着极大的影响 小鼠选择 选择年龄适中、免疫缺陷程度合适的小鼠进行实验。年龄太大或免疫缺陷程度不够的小鼠可能会影响成瘤效果 注射技巧 在接种时，针头应深入皮下约1厘米，以减少注射后细胞悬液从针眼溢出的可能性 注射前一定要排去针管内的空气 监测与记录：每天监测小鼠的存活和肿瘤 伦理问题：在进行小鼠皮下成瘤实验时，需要遵守相关的伦理规范。为避免肿瘤过度生长对小鼠造成不必要的痛苦以上仅供参考