科研 线粒体 共聚焦显微镜 共聚焦 我们都知道线粒体是双层膜结构细胞器，最近就有同学问猫老师，如果想要分清楚线粒体内外膜该怎么做。 [一R]一般来说，就是同时标记线粒体外膜和内膜来观察。如果是做活细胞，最简单的且比较清晰的就是构建线粒体外膜蛋白TOM20（这个是常规的外膜蛋白，当然选择其他的外膜蛋白也可以）的荧光质粒或者HaloTag标签，线粒体内膜可以选择线粒体内膜染料来标记。就我们自己的实验来说，我们常用的线粒体标记搭子如图所示，最近我们选择了HaloTag这个标记，相对于单一的荧光蛋白质粒来说，它可以根据HaloTag配体的不同，选择不同的染料，一个Tag可以分别选择例如488，561，650等等不同的HaloTag染料搭配，同时染料的荧光亮度比最亮的荧光蛋白还要更亮更耐漂白，可以进行长时间时间序列的拍摄。不仅可以用于活细胞，也可以用于固定。我们自己常用的线粒体内膜染料是PK Mito系列，包括PK Mito Deep Red和PK Mito Red，两者主要在于激发和发射不同。所以在我们活细胞观察线粒体外膜和内膜时，选择了HaloTag和PK Mito这两个线粒体染色搭子，并且在普通共聚焦上也取得了很好的效果[斜眼R][斜眼R][斜眼R]，十分推荐。 [二R]如果是做固定细胞的抗体染色，可以质粒标记线粒体基质或者用可用于固定线粒体内膜染料，固定后使用线粒体外膜蛋白TOM20的抗体进行染色，关于TOM20的抗体我们有专门的测试笔记。为什么说用TOM20，主要原因在于它很容易染色且效果更优。