AbMole精研抑制剂十年，最新的科研动态不断与您分享。本期与您分享的是：1,25-二羟基-维生素D3通过上调T细胞 Ig-粘蛋白-3表达诱导巨噬细胞极化为 M2。

巨噬细胞极化在受T细胞免疫球蛋白-粘蛋白-3 (Tim-3)调节的免疫调节中起重要作用。本研究的目的是探讨 1,25-二羟基维生素 D3 [1,25(OH)2D3]在巨噬细胞极化中的作用。应用质粒转染技术制备具有沉默或过表达Tim-3基因的RAW264.7细胞。ELISA用于检测巨噬细胞分泌的炎症因子水平。通过蛋白质印迹分析确定蛋白质水平。使用逆转录定量聚合酶链反应评估 mRNA 的表达水平。已确定 1,25(OH)2D3上调 Tim-3 水平并促进白细胞介素 (IL)-10的分泌。还观察到 1,25(OH)2D3增加转化生长因子-β 的水平并抑制肿瘤坏死因子-α 和 IL-6。结果还表明，Tim-3 基因沉默诱导巨噬细胞极化为经典激活的巨噬细胞 (M1)，Tim-3 基因的过度表达诱导巨噬细胞极化为替代激活的巨噬细胞 (M2)。1,25(OH)2D3处理上调巨噬细胞中Tim-3的表达水平，促进细胞向M2极化并抑制向M1极化。本研究的数据表明，Tim-3 可能诱导巨噬细胞向M2极化，1,25(OH)2D3 通过上调 Tim-3 产生免疫抑制作用。

Phosphatase inhibitors（Abmole，M752）在Western blot实验中用于防止研究中蛋白和脂类的磷酸化状态丢失，为蛋白磷酸化提供更加全面的保护。

Figure 2. Effects of 1,25(OH)2D3 on macrophage at 10-8 and 10-7 M concentrations. RAW264.7 cells were cultured at different 1,25(OH)2D3 concentrations (0, 10-8 and 10-7 M).

结果表明，Tim-3的表达水平在10-8M和10-7M组中逐渐升高。 然而，虽然 1,25 (OH)2D3 不影响 NOS2 和 COD206 的表达，但它降低了 NOS2 mRNA 水平（P<0.05；图 2E-K）。该观察结果表明 1,25(OH) 以剂量依赖性方式促进 Tim-3 表达。

Figure 3. Effects of Tim-3 gene silencing on macrophages.

Tim-3基因沉默后，RAW264.7细胞分泌的TNF-α和IL-6水平上调，而IL-10和TGF-β水平下调（P<0.01；图3A- D)。随着Tim-3基因表达的降低，NOS2 mRNA和蛋白表达水平较NC组和对照组明显升高，而CD206 mRNA和蛋白表达水平显著降低（P<0.01；图 3E-K）。这种现象表明 Tim-3 基因的沉默促进了巨噬细胞向 M1 的极化。

Figure 4. Effects of Tim-3 gene overexpression on macrophages.

此外，还检查了 Tim-3 过表达对细胞因子的影响。确定pTim-3组TNF-α和IL-6水平较NC组降低，IL-10和TGF-β水平较NC升高 组（P<0.01；图 4A-D）。当 Tim-3 过表达时，NOS2 的 mRNA 和蛋白表达水平降低，而 CD206 mRNA 和蛋白的表达水平增加（P<0.01；图 4E-K）。这表明 Tim-3 的过度表达促进了巨噬细胞向 M2 的极化。

鸣谢：Shuyu Liang, et al. Mol Med Rep. 2019 May;19(5):3707-3713.