AbMole精研抑制剂十年，最新的科研动态不断与您分享。本期与您分享的是：在人类肝脏的类器官培养物中基于CRISPR-Cas9的基因敲入和敲除建立人类胎儿肝细胞类器官。

肝脏由两种上皮细胞类型组成：肝细胞和肝导管细胞。先前在方案中描述了用于体外培养人类肝导管细胞作为类器官的培养条件。然而，直到最近，人类原代肝细胞仍难以扩增。在此协议中，我们提供了有关如何克服此限制的完整详细信息，建立了有助于人类胎儿肝细胞作为类器官的长期扩增的培养条件。此外，我们描述了如何在人类胎儿肝细胞和成人肝导管类器官系统中使用CRISPR-Cas9产生（多）基因敲除。使用CRISPR–Cas9和不依赖同源性的类器官转基因（CRISPR-HOT）方法，可以在这些系统中实现有效的基因敲入。这些基因敲除和敲除方法及其多路复用应在多种应用中有用，例如疾病建模，研究基因功能和研究过程（例如细胞分化和细胞分裂）。建立人类胎儿肝细胞类器官培养物的协议需要大约1-2个月。用于基因组工程化人类肝导管类器官和人类胎儿肝细胞类器官的协议需要2到3个月的时间。

Y-27632（Abmole，M1817，纯度 99.63%）添加于培养基中，用于细胞培养。

Fig. 3 | Genome engineering of human fetal hepatocyte organoids.

电穿孔后，立即将750μlHEP分离培养基添加到比色皿中。 推荐使用HEP分离培养基，因为ROCK抑制剂Y-27632的浓度较高，这对于防止单细胞的阳极氧化至关重要。

鸣谢：Delilah Hendriks, et al. Nat Protoc. 2021 Jan;16(1):182-217.