AbMole精研抑制剂十年，最新的科研动态不断与您分享。本期与您分享的是：富含亮氨酸的Alpha-2-Glycoprotein1基因干扰KASUMI-1细胞凋亡的调节。

AML细胞具有很强的增殖和抗凋亡能力。本研究的目的是研究沉默富含亮氨酸的α-2-糖蛋白 1 (LRG1) 基因的影响，发现该基因可调节AML细胞系的肿瘤增殖和凋亡。

本研究中，使用质粒干扰技术用于沉默 KASUMI-1 细胞系中的 LRG1 基因。细胞计数试剂盒-8 (CCK-8) 测定用于测试转导对细胞活力的影响。流式细胞术检测细胞周期和凋亡。分别应用蛋白质印迹和定量实时聚合酶链反应 (RT-qPCR) 检测蛋白质和 mRNA 的表达水平。对具有 CD34+CD38 表型的 KASUMI-1 细胞通过流式细胞术进行分选。 siLRG1质粒转染后，LRG1表达水平下调，细胞活力降低。 LRG1 基因的沉默阻止 KASUMI-1 细胞处于 G0/G1 期并促进细胞凋亡。进一步的实验发现，LRG1 基因沉默显着下调细胞周期相关蛋白和抗凋亡蛋白，同时上调促凋亡蛋白。 LRG1 基因表达的下调也会抑制 JAK-STAT 通路的信号转导。LRG1基因沉默调节细胞周期蛋白和凋亡相关蛋白的表达，降低细胞活力，促进凋亡，可能是通过抑制JAK-STAT通路。

Phosphatase inhibitors（Abmole，M7528）被用于防止研究中蛋白和脂类的磷酸化状态丢失，为蛋白磷酸化提供更加全面的保护，以更好地进行Western blot等实验。

Figure 2. Effects of siLRG1 plasmid on the expression of LRG1 and cell viability in KASUMI-1 cells. KASUMI-1 cells were transfected with PBS (control group), negative-siRNA plasmid (NC group), siLRG1 plasmid (siLRG1 group).

为了研究 siLRG1 质粒的转染效率，RT-qPCR 和蛋白质印迹被应用于研究转染效率。结果表明，转染后siLRG1 mRNA和蛋白表达水平显著降低（P<0.01）。 这表明我们的质粒构建和转染是成功的。

Figure 3. Effect of siLRG1 plasmid transfection on cell cycle.

为了研究G0/G1中细胞阻塞的原因，应用蛋白质印迹分析和RT-qPCR来评估细胞周期相关蛋白Cyclin D1和PCNA的表达。 结果显示LRG1基因沉默显著下调Cyclin D1和PCNA基因和蛋白的表达（P<0.01）。这表明在沉默LRG1基因后，KASUMI-1细胞通过下调细胞周期蛋白D1和PCNA的表达水平而在G0/G1期停滞。

鸣谢：Shishan Xiao, et al. Med Sci Monit. 2018 Nov 20;24:8348-8356.