AbMole精研抑制剂十年，最新的科研动态不断与您分享。本期与您分享的是：三维单细胞成像分析完整Ca活检组织中的RNA和蛋白表达

显微镜分析Ca样本通常是在固定的，采用超薄切片和蛋白标记组织。然而，这些检查并不能揭示肿瘤复杂的三维结构，也不能检测异常转录本。本研究中报告了一种方法，命名为DIIFCO(用于原位免疫荧光标记清除癌样)，用于完整Ca组织和类器官中RNA和蛋白质的多模态体积成像。使用DIIFCO在多种癌症组织中以单细胞分辨率对多种编码RNA和非编码RNA的表达进行空间分析。定量单细胞分析揭示了肿瘤干细胞样细胞的空间龛位，并显示在三阴性乳腺癌组织中，龛位以更高的密度存在。改进的分子表型和癌症的组织病理学诊断可能带来患者肿瘤生物学的新见解。

Y-27632 (Abmole, M1817，纯度 99.66%) 是一种选择性的ROCK1(p160ROCK)抑制剂，Ki为140 nM，比对其他激酶包括PKC，cAMP依赖性蛋白激酶， MLCK和PAK的作用强200多倍。

作者在研究过程中，在培养基中添加Abmole的Y-27632，并用于类器官的培养呵孵育。其中，人类乳腺和结肠肿瘤的类器官如前所述建立和维持。乳腺肿瘤的培养基包含DMEM / F12培养基，青霉素链霉素,B-27,烟酰胺,10% R-spondin-1-conditioned介质,EGF ， neuregulin 1 ，FGF7，FGF10 , y - 27632 ， Primocin,A83-01 和SB202190 。对于结肠肿瘤类器官，培养基中含有DMEM/F12培养基，包括谷氨酰胺、HEPES 、青霉素链霉素、B-27 、烟酰胺、n-乙酰半胱氨酸、noggin 、20% r - spontin -1培养基、EGF 、A83-01和SB202190 。所有的有机样品在DIIFCO处理前用4%的PFA固定过夜。

Y-27632 2HCl是一种选择性的ROCK1(p160ROCK)抑制剂，Ki为140 nM，比对其他激酶包括PKC，cAMP依赖性蛋白激酶， MLCK和PAK的作用强200多倍。Y-27632也同等有效抑制ROCK-II。Y-27632作用于PKC, cAMP依赖的蛋白激酶和 肌球蛋白轻链激酶(MLCK)几乎没有活性，Ki分别为26 μM, 25 μM, 和 > 250 μM。Y-27632通过选择性抑制Ca2+敏感化，而抑制多种兴奋剂而不是KCl，包括Phenylephrine, Histamine, Acetylcholine, Serotonin, Endothelin,和Thromboxane诱导的平滑肌收缩，IC50为0.3-1 μM。

鸣谢：Tanaka N , Kanatani S , Kaczynska D , et al. Three-dimensional single-cell imaging for the analysis of RNA and protein expression in intact tumour biopsies[J]. Nature Biomedical Engineering, 2020, 4(9):1-14.