流式配色原则第五弹——亲代与子代👪

聚焦细胞检测 2024-07-30 14:59:27
子代与亲代是指抗原之间是上下级关系,即下级抗原是在上级抗原的基础上进行分析的。比如CD3+T细胞中,有一群细胞表达CD4,那么CD3就属于亲代,CD4属于子代。即配色时,允许CD4对CD3有荧光溢漏,但避免CD3对CD4有荧光溢漏。 多色流式实验中,因为表达CD4的细胞都表达CD3 ,所以即使CD4对CD3有荧光溢漏,也不会对CD3的检测造成影响(如P2所示)。但如果CD3对CD4有荧光溢漏,那么CD3溢漏的荧光会干扰CD4的检测(如P3所示)。 对于CD3和CD4这种分群明显的指标,这种背景信号的干扰可能影响并不太大,但如果是低表达或者连续表达的指标,由于荧光溢漏导致的背景干扰就显得比较严重了。 以Th1细胞为例,Th1细胞需要检测CD4和IFN- γ的表达情况,其中CD4是亲代,IFN- γ是子代。因为PE/Cyanine7通道对PE通道有较高的荧光溢漏,所以IFN-γ可以搭配PE/Cyanine7,CD4搭配PE。此时,IFN-γ处于没有干扰的通道,容易进行补偿调节,有利于数据的分析。

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