ELISA样本处理的正确姿势！🧐

Q1 血清血浆样本应该选用哪种真空采血管收集？ A1 血清：不含抗凝剂的采血管/含促凝剂采血管 （通常为红色、黄色、橘色管盖的采血管） 血浆：含抗凝剂的采血管 （通常为绿色、紫色管盖的采血管） 样品收集后，若在1周内进行检测，可保存于2-8℃条件下；若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃条件下（1个月内检测）或-80℃条件下（3个月内检测），避免反复冻融。 检测前，应缓慢融化冷冻过的样本，并离心除去冻融过程中产生的沉淀物。 Q2 采集时，如何尽可能避免溶血现象？ A2 溶血可由多种理化因素和毒素引起。在体外，机械性强力振荡、低温冷冻等诱因均可引起溶血。为避免溶血对检测结果产生影响，应注意： （1）静脉采血时，回抽压力不宜过大； （2）一次性采血量不宜过少； （3）采集的全血不宜激烈振荡； （4）离心转速不宜过大； （5）收集的全血需尽快处理成血清/血浆，全血不能冻融； （6）若需要麻醉采血，需使用没有溶血作用的麻醉剂。 Q3 组织/细胞样本收集中提到的“反复冻融”，过程应该如何操作？ A3 组织样本：组织研磨后，将其-80℃放置1h/液氮放置0.5h，再置于30℃水浴锅中轻微振荡，使其迅速融化，反复操作1-2次即可； 细胞样本：按上述操作步骤，反复冻融2-3次。若为膜蛋白，可以适当做超声处理，但需要控制好超声的温度、频率； 建议在样本中提前加入蛋白酶抑制剂。常规情况下推荐使用PMSF。 Q4 怎样判断我的样本是否需要稀释或做其他处理？ A4 试剂盒的检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围，建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度，并通过预实验确定样本的实际浓度情况。 如果是常规样本类型，可以咨询ELISA技术支持，以获取样本的推荐稀释倍数，并安排预实验检测； 如果样品中待测物的浓度过高或过低，请对样本做适当的稀释或浓缩； 如果样本中的分析物浓度远低于试剂盒的最低检测限，建议选择灵敏度更高的试剂盒来检测。